1、温度效應:經研究證實在温育中的熱力學梯度可能是根本原因。孔板的聚苯乙烯本身為不良熱導體,在實驗室的常規ELISA測定中,將板從室温(通常在25℃左右)置於37℃温箱,板也升温時,在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學梯度。2、蒸發效應:雖然通常細胞培養箱中都會放置一盤雙蒸水以維持培養箱中的濕度,但仍難達到多孔板中的濕度,特別是在培養箱經常開關的情況更是如此。由於位置效應,邊緣孔的濕度較中間孔更低,水分揮發的現象就更為嚴重。這樣就容易造成四周培養基的體積會明顯少於中間孔,而四個角落的孔尤為嚴重