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dna怎麼插入載體

欄目: 心理 / 發佈於: / 人氣:5.38K
dna怎麼插入載體

運載體多為質體,是很穩定且牢固的環狀dna。

dna分子就像梯子,梯子的扶手由磷酸二酯鍵構成,非常牢固,要限制性內切酶才能切開。

切開後質體會出現兩個粘性末端,所以必須用相同的內切酶切下目的基因,這樣目的基因和粘性末端才能接合。

基因工程的基本操作步驟主要包括四步:(1)目的基因的獲取,即提取目的基因(2)基因表達載體的構建,即使目的基因與運載體結合(3)將目的基因導入受體細胞(4)目的基因的檢測與表達,即檢測目的基因的表達是否符合特定性狀要。

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dna插入載體都是用一種方法,限制性內切酶法。整個過程的原理:1.從供體中製備高純度的染色體基因組DNA2.用合適的限制酶把DNA切割成若干個片段3.將這些片段分別與適當的載體分子進行體外連接4.重組載體導入受體細胞中或包裝成噬菌體,適宜條件下培養5.觀察培養基中的重組菌落或噬菌斑,篩選陽性克隆,再將其克隆中的目的基因提取分離出來。

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首先用同一種限制性內切酶對dna模板和載體進行酶切,然後用dna連接酶使dna跟載體的粘性末端進行連接。然後對載體進行培養,達到插入載體的目的。

Tags:載體 dna