乙酰膽鹼是神經肌肉接頭處的化學遞質。
乙酰膽鹼是迷走神經釋放的遞質。在許多其他器官中(例如胃腸、膀胱、頜下腺等),刺激其副交感神經也可在灌注液中找到乙酰膽鹼。由此認為,副交感神經節後纖維都是釋放乙酰膽鹼作為遞質的。釋放乙酰膽鹼作為遞質的神經纖維,稱為膽鹼能纖維。