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sds分離原理|ce

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ce-sds分離原理

ce-sds非還原法分離原理

毛細管電泳是以高壓直流電場為驅動力,以毛細管為分離通道。毛細管內先填充凝膠,此時凝膠會在毛細管內形成分子篩,樣品依分子量的大小在毛細管內移動速度不同而進行分離,能夠有效減小組分擴散,所得峯型尖鋭,分離效率高。 CE-SDS(非還原) 儀器組成 毛細管電泳系統的基本結構包括進樣、填灌/清洗、電流回路、毛細管/温度控制、檢測/記錄/數據處理等部分。 CE-SDS(非還原) 檢測器 CE-SDS(非還原) 進樣方式 1. 流體力學進樣方式 (1)進樣端加壓 (2)出口端抽真空 (3)虹吸進樣 進樣量:毛細管長度的1%-2%nL級、非常小 2. 電動進樣方式 毛細管一端插入樣品瓶,加電壓。 3. 擴散進樣 試樣通過擴散作用進入分離柱端口處。 CE-SDS(非還原) 工作電壓的確定 1、在電泳條件下,改變電壓(或電流)測定對應的電流(或電壓) 2、做電壓~電流曲線 3、取線性關係中的最大電壓(或電流),作為分離電壓(或電流)。線性以上的電壓,焦耳熱效應過大,一般不宜選用。但如果分離效率很高,就可以選用,以便加快分離速度。在做CGE時,電場強度應控制在150~400V/cm之間,否則容易導致凝膠的破壞。 電泳温度的選擇 電泳温度的選擇,主要是指毛細管外表温度的選擇與控制。温度變化不僅影響分離的重現性,而且影響分離效率。温度選擇應考慮:熱效應控制、重現性控制、分離效率控制盒分離介質對温度的限制等因素。多數情況下,在20~30℃之間進行電泳,就能獲得良好的分離結果。 各試劑的作用 SDS-MW Sample Buffer: 由於蛋白是兩性的,與SDS結合會使蛋白帶負電荷,使其在毛細管中往正極方向移動。

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