葉綠素吸收波長需用幾個波長下的吸光度值，根據經驗公式來分別計算出各項指標的含量.
因為葉綠體色素由葉綠素a、葉綠素b等物質組成，試液是多組分的混合溶液，在試液中分離這幾類物質的難度較大，且無必要.葉綠素a在645nm和663nm 處均有吸收，在645nm處吸光係數較小，為16.75，在663nm 處較大，為82.04葉綠素b 在645nm和663nm 處亦都有吸收，但在645nm處吸光係數較大，為45.60，在663nm 處較小，為9.27.由此可知：葉綠素a的吸收峯值出現在663nm 處，該吸收曲線延伸到645nm處，在此波長處的吸收係數不如在663 nm 處大，因此在計算公式中求算葉綠素a的含量時，需扣除葉綠素b在663nm和645nm 處的吸光度值，再進行計算.
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